การโคลน และวิเคราะห์หาลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีนเซลลูเลสจากหอยเชอรี่ (Pomacea canaliculata) ในประเทศไทย

มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์;สำนักงานคณะกรรมการอุดมศึกษา;กระทรวงศึกษาธิการ;กระทรวงเกษตรและสหกรณ์;กระทรวงวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี;กระทรวงทรัพยากรธรรมชาติและสิ่งแวดล้อม;กระทรวงเทคโนโลยีสารสนเทศและการสื่อสาร;สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ;สำนักงานกองทุนสนับสนุนการวิจัย

การประชุมทางวิชาการของมหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ ครั้งที่ 44

กรุงเทพฯ

30 ม.ค.-2 ก.พ. 2549

กรุงเทพฯ

หน้า 396-403

700 หน้า

ไทย

Thai National AGRIS Centre, Office of The University Library Kasetsart University, P.O. BOX 1084 Kasetsart Chatuchak, Bangkok 10903, Thailand

หอยเชอรี่;ยีนเซลลูเลส;การโคลน;ลำดับนิวคลีโอไทด์

POMACEA CANALICULATA;CELLULASE;GENES;CLONING;NUCLEOTIDE SEQUENCING

เซลลูเลสเป็นเอนไซม์ที่เร่งปฏิกิริยาการย่อยสลายเซลลูโลส เมื่อไม่นานมานี้ได้มีการค้นพบเอนไซม์เซลลูเลสในน้ำย่อยในกระเพาะของสิ่งมีชีวิตพวกหอยหลายชนิด ต่อมามีการแยกและศึกษาลักษณะสมบัติของเอนไซม์ รวมถึงโครงสร้างสามมิติของเอนไซม์กลุ่มนี้ ในงานวิจัยนี้มีความสนใจที่จะแยกยีนของเอนไซม์เซลลูเลสจากหอยเชอรี่ (Pomacea canaliculata) โดยการโคลน cDNA ของยีนเซลลูเลสจากส่วนกระเพาะอาหารของหอยเชอรี่ด้วยเทคนิค Reverse transcription-PCR (RT-PCR) จากการทำ RT-PCR พบแถบดีเอ็นเอขนาดประมาณ 1250 คู่เบส โดยให้ชื่อว่ายีน EGX ซึ่งเมื่อโคลนเข้า pGEM-T easy vector และวิเคราะห์หาลำดับนิวคลีโอไทด์พบ open reading frame (ORF) ขนาด 1188 คู่เบส ที่สามารถถอดรหัสให้กรดอะมิโน 395 ตัว มีน้ำหนักโมเลกุล 44 กิโลดาลตัน เมื่อเปรียบเทียบลำดับของกรดอะมิโนของ EGX พบว่ามีความคล้ายกับยีนเซลลูเลสในหอย Ampullaria crossean 98 เปอร์เซ็นต์ งานวิจัยในขั้นต่อไปจะศึกษาการจัดเรียงตัวของยีนและทำการแสดงออกเพื่อผลิตรีคอมบิแนนท์โปรตีนเพื่อศึกษาสมบัติของเอนไซม์ต่อไป

Cellulase is an enzyme that catalyzes the degradation of cellulose. Recently, the cellulose hydrolytic enzyme was isolated from the stomach juice of several mollusca. The three-dimensional structure of the enzyme has been determined by X-ray crystallography. In this research, the full length cDNA of a cellulase designated as EGX was isolated from stomach tissue of golden apple snail (Pomacea canaliculata) by Reverse transcription-PCR (RT-PCR). The 1250 bp DNA fragment was cloned into pGEM-T easy vector and sequenced. Nucleotide sequencing analysis revealed a single open reading frame (ORF) of 1188 bp encoding 395 amino acid residues with molecular weight 44 kDa. The deduced amino acid sequence of EGX cDNA showed 98 percent similarity to that of Ampullaria crossean EGX. The further study is to determine the genomic organization and recombinant expression of this gene.

[1] จันทร์ประภา อิ่มจงใจรัก
[2] ปิติ อ่ำพายัพ
[3] ศิริพร สิทธิประณีต

[1] Chanprapa Imjongjirak
[2] Piti Amparyup
[3] Siriporn Sittipraneed