การประยุกต์ใช้เทคนิค DGGE เพื่อเพิ่มศักยภาพทางด้านการกําจัดโดยใช้จุลินทรีย์ โดยวิธี Bioaugmentation ในดินที่มีการปนเปื้อนด้วยสารประกอบไฮโดรคาร์บอน

มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
สำนักงานคณะกรรมการอุดมศึกษา
กระทรวงศึกษาธิการ
กระทรวงเกษตรและสหกรณ์
กระทรวงวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี
กระทรวงทรัพยากรธรรมชาติและสิ่งแวดล้อม
กระทรวงเทคโนโลยีสารสนเทศและการสื่อสาร
สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
สำนักงานกองทุนสนับสนุนงานวิจัย

การประชุมทางวิชาการของมหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ ครั้งที่ 42

กรุงเทพฯ

3-6 ก.พ. 2547

กรุงเทพฯ

หน้า 395-403

499 หน้า

Thai National AGRIS Centre, Office of The University Library Kasetsart University, P.O. BOX 1084 Kasetsart Chatuchak, Bangkok 10903, Thailand

T01-มลพิษ

P34-จุลชีพในดิน

ดิน;ไฮโดรคาร์บอน;การปนเปื้อน;ไอโซเลชั่น เทคนิค;Bacteria;ลายพิมพ์ดีเอ็นเอ

Soil;Hydrocarbons;Contamination;Isolation techniques;Bacteria;Dna fingerprinting

ดิน;สารประกอบไฮโดรคาร์บอน;จุลินทรีย์;แบคทีเรีย;การปนเปื้อน;การกำจัด

Denature gradient gel electrophoresis;Bioaugmentation

Research aims to develop a bioremediation strategy for hydrocarbon contaminated soils based on bioaugmentation with ecologically relevant identified bacteria using Denature Gradient Gel Electrophoresis (DGGE) and Isolation technique. In the present study, a culture-independent study we conducted using the DGGE technique. Microcosms were set up by an adjusted C:N:P ratio in lubricant contaminated soil to 100:10:2 and incubated at 250C. Soil samples were collected at 0 hr, 1, 7, 28, and 42 days. DNA and RNA were extracted and then 16S rDNA was amplified following PCR with a specific primer which was established by targeting the variable V3 regions of the 16S rDNA. The fingerprinting of the bacterial community was separated using electrophoresis. Then the DGGE patterns were analyzed and the dominant bands were chosen using Multivariate pattern recognition (Stepwise discriminate function). We found that diverse relationships between dominant bacteria were represented. The phylogenetic tree revealed the dominant species as Bacillus marisflavi (A18), Microbacterium oxydans (A20), and Pseudomonas oleovorans (A16). The cultures of bacteria population samples were grown in the laboratory. The colonies with different morphology were chosen for classification. The isolates were close in character to Genus Bacillus, Microbacteriun, and Pseudomonas were selected for biochemical tests. The results from biochemical tests could classify most bacteria closed to Bacillus, Actinobacteria, and Proteobacteria. Phylogenetic relationship can be shown in a variety of bacteria species. The results from a phylogenetic tree found Bacillus marisflavi (D46A), Microbacterium oxydans (B31), and Pseudomonas oleovorans (My1 ) which were close to the dominant species from the DGGE technique. The members of the other Genus that were chosen for this study that probably they could survive in contaminated soil with hydrocarbon as Genus Brevibacillus, Brevibacterium, Arthrobacter, Brachybacterium and Massilia. The possibilities of using the prospective bacteria as bioaugmentation for the in situ remediation of petroleum-contaminated soil will be studied

[1] ศวพร ศุภผล (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ คณะเกษตร ภาควิชาปฐพีวิทยา)
[2] ศุภมาศ พนิชศักดิ์พัฒนา (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ คณะเกษตร ภาควิชาปฐพีวิทยา)
[3] สาวิตร ตระกูลน่าเลื่อมใส (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ คณะวิทยาศาสตร์ ภาควิชาจุลชีววิทยา)