การพัฒนาวิธี in situ hybridization ในการตรวจหาโรคดวงขาว ในกุ้งกุลาดำ (Penaeus monodon)

มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
กระทรวงเกษตรและสหกรณ์
กระทรวงวิทยาศาสตร์เทคโนโลยีและสิ่งแวดล้อม
ทบวงมหาวิทยาลัย

การประชุมทางวิชาการของมหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ ครั้งที่ 38

กรุงเทพฯ

1-4 ก.พ. 2543

กรุงเทพฯ

หน้า 125

430 หน้า

Thai National AGRIS Centre, Office of The University Library Kasetsart University, P.O. BOX 1084 Kasetsart Chatuchak, Bangkok 10903, Thailand

L73-โรคสัตว์

PENAEUS MONODON;ANIMAL DISEASES

กุ้งกุลาดำ;โรคดวงขาว;วิธี IN SITU HYBRIDIZATION

ผลผลิต PCR ขนาด 200 เบสจาก primer ที่จำเพาะเจาะจงต่อ SEMBV (SMBV1 and SMBV4) ถูกนำมา ligate กับพลาสมิดเวกเตอร์ PCR II และนำใส่เข้าไปในเชื้อแบคทีเรีย E. coli นำไปเพิ่มจำนวน และใช้เป็นดีเอ็นเอ แม่แบบในการผลิตตัวตรวจสอบที่ติดฉลากด้วย digoxigenin ด้วยวิธี PCR ตัวตรวจสอบที่เตรียมขึ้นนำไปตรวจหาเชื้อไวรัสดวงขาวในเนื้อเยื่อกุ้งด้วยวิธี in situ hybridization โดยตัวตรวจสอบสามารถให้ผลบวกต่อเชื้อไวรัสในเนื้อเยื่อกุ้งได้โดยไม่เกิดปฏิกริยากับเนื้อเยื่อปกติของกุ้งกุลาดำ และเนื้อเยื่อกุ้งกุลาดำที่ติดเชื้อไวรัส Monodon baculovirus จากการทดลองสามารถตรวจพบไวรัสในเนื้อเยื่อต่างๆ ของกุ้งกุลาดำได้ดังนี้ กระเพาะอาหาร เปลือก เหงือก หัวใจ midgut และเนื้อเยื่อน้ำเหลือง

200 bp. PCR product from specific primer set (SMBV1 and SMBV4) for Systemic Ectodermal and mesodermal baculovirus (SEMBV) was ligated to plasmid vector (PCR II) and used to transform E.coli. This clone was used to prepare digoxigenin-labeled DNA probe using PCR technique for the detection of SEMBV in shrimp tissue by an in situ hybridization assay. Probe readily distinguished SEMBV-infected from uninfected shrimp tissues and did not react to shrimp tissues infected with Monodon baculovirus. Positive cells were localized to the stomach, integument, gill, heart, midgut and lymphoid organ.

[1] วิศณุ บุญญาวิวัฒน์ (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ คณะสัตวแพทยศาสตร์ ภาควิชาอายุรศาสตร์)
[2] ธีระพล ศิรินฤมิตร (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ วิทยาเขตกำแพงแสน คณะสัตวแพทยศาสตร์ หน่วยชันสูตรโรคสัตว์)
[3] ปรีดา เลิศวัชระสารกุล (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ คณะวิทยาศาสตร์ ภาควิชาพันธุศาสตร์)
[4] อรวรรณ์ บุตรดี (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ วิทยาเขตกำแพงแสน คณะสัตวแพทยศาสตร์ หน่วยชันสูตรโรคสัตว์)
[5] ทินวรรธน์ ศรีสุข (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ วิทยาเขตกำแพงแสน คณะสัตวแพทยศาสตร์ โรงพยาบาลสัตว์กำแพงแสน หน่วยสัตว์น้ำ)
[6] วรวิทย์ วัชชวัลคุ (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ วิทยาเขตกำแพงแสน คณะสัตวแพทยศาสตร์ หน่วยชันสูตรโรคสัตว์)

[1] Visanu Boonyawiwat (Kasetsart University, Bangkok (Thailand). Faculty of Veterinary Medicine. Department of Medicine)
[2] Theerapol Sirinarumitr (Kasetsart University. Kamphaeng Saen Campus, Nakhon Pathom (Thailand). Faculty of Veterinary Medicine. Veterinary Diagnostic Laboratory)
[3] Preeda Lertwatcharasarakul (Kasetsart University, Bangkok (Thailand). Faculty of Science. Department of Genetics)
[4] Orawan Boodde (Kasetsart University. Kamphaeng Saen Campus, Nakhon Pathom (Thailand). Faculty of Veterinary Medicine. Veterinary Diagnostic Laboratory)
[5] Thinnawat Srisook (Kasetsart University. Kamphaeng Saen Campus, Nakhon Pathom (Thailand). Faculty of Veterinary Medicine. Veterinary Teaching Hospital)
[6] Worawidh Wajjwalku (Kasetsart University. Kamphaeng Saen Campus, Nakhon Pathom (Thailand). Faculty of Veterinary Medicine. Veterinary Diagnostic Laboratory)