การศึกษาเบื้องต้น: การผลิตตัวอ่อนโคระยะบลาสโตซีสต์โดยการปฏิสนธินอกร่างกาย

มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
กระทรวงเกษตรและสหกรณ์
กระทรวงวิทยาศาสตร์ เทคโนโลยีและสิ่งแวดล้อม
ทบวงมหาวิทยาลัย

การประชุมทางวิชาการของมหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ ครั้งที่ 35

กรุงเทพฯ

3-5 ก.พ. 2540

กรุงเทพฯ

หน้า 475-479

567 หน้า

ไทย

Thai National AGRIS Centre, Office of The University Library Kasetsart University, P.O. BOX 1084 Kasetsart Chatuchak, Bangkok 10903, Thailand

L10-การปรับปรุงพันธุ์สัตว์

BOVINE;FERTILIZATION;IN VITRO;ANIMAL EMBRYOS

โค;การปฏิสนธินอกร่างกาย;ตัวอ่อน;การผลิต;ระยะ BLASTOCYSTS;วิธีการ

การศึกษานี้มีจุดประสงค์เพื่อหาเทคนิคที่เหมาะสมเพื่อผลิตตัวอ่อนโคโดยการปฏิสนธินอกร่างกาย โดยนำไข่อ่อน (Immature oocyte) จำนวน 1,350 ใบ ที่ดูดเก็บจากรังไข่โคจำนวน 200 รังไข่จากโรงฆ่าสัตว์ เพื่อเพาะเลี้ยงให้เจริญถึงขั้นพร้อมปฏิสนธิ (Mature oocyte) ในน้ำยา TCM-199+5 percent Calf serum (CS) ที่ 38.5 องศาเซลเซียส, 5 เปอร์เซ็นต์ CO2 20 ชม. มีไข่เจริญถึงขั้นพร้อมปฏิสนธิจำนวน 1,200 ใบ และนำมาปฏิสนธิกับอสุจิ (12.5x10**(6)sperm/ml) ที่ล้างด้วย TCM-199+0.125 mM sodium pyruvate+0.5 mM caffeine+1 micro l/ml heparin (Novo-Haparin:5000 U/ml) แล้วเลี้ยงที่ 38.5 องศาเซลเซียส, 5 เปอร์เซ็นต์ CO2 12 ชั่วโมง มีตัวอ่อนที่เกิดจากการปฏิสนธิ 600 ตัวอ่อน หรืออัตราปฏิสนธิ 50 เปอร์เซ็นต์ (600/1,200) และเมื่อทำการเพาะเลี้ยงตัวอ่อนต่อ 7 วัน ในหยดน้ำยา 100 micro l TCM-199+5 percent CS ที่เททับด้วย mineral oil ที่ 38.5 องศาเซลเซียส, 5 เปอร์เซ็นต์ CO2 มีตัวอ่อนเจริญถึงระยะบลาสโตซีสต์ 106 ตัวอ่อน หรือ 17.6 เปอร์เซ็นต์ (106/600) ของตัวอ่อนที่ปฏิสนธิทั้งหมด หรือ 8.8 เปอร์เซ็นต์ (106/1,200) ของไข่ที่เจริญถึงขั้นพร้อมปฏิสนธิ และทำการย้ายฝากตัวอ่อนระยะบลาสโตซีสต์ 2 ตัวอ่อน โดยวิธีนิรศัลยกรรมซึ่งแม่โคตัวรับตั้งท้องและจะคลอดในเดือนมีนาคม 2540 จากการศึกษานี้ซึ่งเป็นการศึกษาเบื้องต้นแสดงให้เห็นว่าเทคนิคนี้สามารถผลิตตัวอ่อนโคระยะบลาสโตซีสต์ได้

Objective of this study was to determine the optimal bovine IVF techniques at AI division (Pathum thani) laboratory for applying in cattle production. Bovine oocytes were aspirated from 2-6 mm follicles of 200 abattoir ovaries. Cumulus oocyte complexes (COCs) with tightly attached cumulus cells were used. Selected COCs (1,350) were matured in vitro in TCM-199+5 percent calf serum (CS) at 38.5 deg C under 5 percent CO2 in air. Two 0.25 ml straws of frozen semen were thawed and washed twice with TCM-199+0.125 mM sodium pyruvate+0.5 mM caffeine (Sigma Chemical Co.)+1(l/ml heparin (Novo-Haparin:5000 U/ml) by centrifugation (x500g), 10 min. Mature oocytes (1,200) were inseminated with 12.5x10**(6) sperm/ml and incubated at 38.5 deg C, 5 percent CO2 in air. After 12 h. inseminated mature oocytes were washed and cultured in 100 micro l droplets of TCM-199+5 percent CS under mineral oil at 38.5 deg C, 5 percent CO2 in air for 7 days. The results showed 50 percent (600/1200) fertilization rate, 17.6 percent (106/600) blastocyst rate of all fertilized eggs and 8.8 percent (106/1200) blastocyst rate of all mature oocytes. This study indicated that slaughterhouse oocytes can be matured, fertilized and cultured in vitro to the blastocyst stage under this regimen.

[1] วิบูลย์ เยี่ยงวิศวกูร (กรมปศุสัตว์ กองผสมเทียม งานวิจัยและพัฒนาเทคโนโลยีการผสมเทียม)
[2] มาลี อภิเมธีธำรง (กรมปศุสัตว์ กองผสมเทียม งานวิจัยและพัฒนาเทคโนโลยีการผสมเทียม)
[3] ยันต์ สุขวงศ์ (กรมปศุสัตว์ กองผสมเทียม งานวิจัยและพัฒนาเทคโนโลยีการผสมเทียม)

[1] Viboon Yiengvisavakul (Department of Livestock Development, Bangkok (Thailand). Artificial Insemination Division. Biotechnology in Animal Reproduction Section)
[2] Malee Apimeteetumrong (Department of Livestock Development, Bangkok (Thailand). Artificial Insemination Division. Biotechnology in Animal Reproduction Section)
[3] Yant Sukwongs (Department of Livestock Development, Bangkok (Thailand). Artificial Insemination Division. Biotechnology in Animal Reproduction Section)