การศึกษาประสิทธิภาพของการวิเคราะห์ Escherichia coli 0157:H7 (EHEC) ด้วยวิธี Immunochromatographic techniques lae Modified BAM Method

มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
กระทรวงเกษตรและสหกรณ์
กระทรวงวิทยาศาสตร์ เทคโนโลยีและสิ่งแวดล้อม
ทบวงมหาวิทยาลัย

การประชุมทางวิชาการของมหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ ครั้งที่ 35:

กรุงเทพฯ

3-5 ก.พ. 2540

กรุงเทพฯ

หน้า 448-460

567 หน้า

ไทย

Thai National AGRIS Centre, Office of The University Library Kasetsart University, P.O. BOX 1084 Kasetsart Chatuchak, Bangkok 10903, Thailand

Q03-การปนเปื้อนอาหาร

PASTEURIZED MILK;PRAWNS AND SHRIMPS;FROZEN PRODUCTS;ESCHERICHIA COLI;BIOLOGICAL CONTAMINATION;IMMUNOLOGICAL TECHNIQUES

นมพาสเจอร์ไรซ์;กุ้งบดแช่แข็ง;ESCHERICHIA COLI;วิธี IMMUNOCHROMATOGRAPHIC;MODIFIED BAM METHOD;การวิเคราะห์;วิธีการ;ประสิทธิภาพ;การปนเปื้อน

การศึกษาประสิทธิภาพของ technique (PATH-STIK) test kit โดยการเติมเชื้อ E.coli O157:H7 ลงในตัวอย่างน้ำนมพาสเจอร์ไรด์และกุ้งบดแช่แข็งพบว่าก่อนการอบเพาะเชื้อผลิตภัณฑ์นมที่มีปริมาณเชื้อปนเปื้อนตั้งแต่ 2.5*10**(4) CFU/g ขึ้นไปของตัวอย่างทั้งสองชนิดสามารถตรวจพบได้โดยวิธี PATH-STIK แต่หลังการอบเพาะเชื้อที่ 42 องศาเซลเซียส นาน 6 ชั่วโมง แล้ว ในตัวอย่างน้ำนมและกุ้งบดพบว่าปริมาณเชื้อเริ่มต้น 2.5*10**(1) และ 2.5*10**(3) CFU/g ขึ้นไปให้ผลบวกตามลำดับ ขณะที่ 24 ชั่วโมง ให้ผลบวกทุกตัวอย่างทั้งสองผลิตภัณฑ์ สำหรับวิธีการเพาะเชื้อ Modified Bacteriological Analytical Manual (BAM) ที่ 42 องศาเซลเซียส นาน 6 และ 24 ชั่วโมง ให้ผลบวกทุกตัวอย่าง เมื่อเปรียบเทียบกับวิธี (BAM) พบว่าในตัวอย่างน้ำนมซึ่งมีปริมาณเชื้อประจำถิ่นน้อยให้ผล Sensitivity 87.50 เปอร์เซ็นต์ (6 ชั่วโมง) และ 100 เปอร์เซ็นต์ (24 ชั่วโมง) และในตัวอย่างกุ้งบดซึ่งมีปริมาณเชื้อประจำถิ่นสูงให้ผล Sensitivity 62.50 เปอร์เซ็นต์ (6 ชั่วโมง) และ 100 เปอร์เซ็นต์ (24 ชั่วโมง) การศึกษาปริมาณปนเปื้อนในอาหาร 50 ตัวอย่าง ไม่พบมีการปนเปื้อน คิดเป็น overall sensitivity 75.00 เปอร์เซ็นต์ (6 ชั่วโมง), 100 เปอร์เซ็นต์ (24 ชั่วโมง) และ overall specificity 97.78 เปอร์เซ็นต์ (6 ชั่วโมง และ 24 ชั่วโมง) ค่า overall Chi square ที่มีค่าสูงกว่า 3.84 PATH-STIK test, E.coli O157:H7 immunochromatographic technique สามารถใช้เป็น rapid screening method สำหรับตรวจหาเชื้อ E.coli O157:H7 ในผลิตภัณฑ์อาหารและสายการผลิตตามระบบ HACCP ได้ อย่างไรก็ตามตัวอย่างที่ให้ผลบวกต้องทำการตรวจสอบยืนยันโดยใช้ Serological test และ Biochemical test ต่อไป

Pasteurized milk and frozen shrimp meat which generally inoculated with strains of E.coli O157 H7 were analyzed by the new immunochromatographic technique (PATH-STIK) for the rapid detection of EHEC (E.coli O157: H7) and the Modified Bacteriological Analytical Manual (BAM) culture method. Without enrichment, both spiked milk samples of less than 2.5*10**(4) CFU/g (initial loaded) were negative by PATH-STIK. After 6 h incubation at 42 deg C less than 2.5*10**(1) and 2.5*10**(3) CFU/g were negative in spiked milk and shrimp, respectively. And 24 h incubation all of the spike samples were positive by PATH-STIK. While all spiked pasteurized milk and shrimp samples were positive by BAM after 6h and 24h incubation. During this study fifty naturally contaminated of foods representative of a wide variety of food products were analyzed by both methods. The PATH-STIK test in correlation with BAM for low background of potentially healthy competing bacteria (pasteurized milk) resulted in a sensitivity of 87.50 percent (6 h) and 100 percent (24 h). The correlation for high background (minced shrimp) resulted in a sensitivity of 62.50 percent (6 h) and 100 percent (24 h). The overall sensitivity in this study were 75.00 (6 h) and 100 percent (24 h). The overall specificity in this study were 97.78 percent (6 h and 24 h) and overall Chi square > 3.84. PATH-STIK technique can be used as a rapid screening tool for the detection of E. coli O157:H7 in certain food products and food chains in the HACCP system. Nevertheless, serological and biochemical test must be done for the positive samples confirmation.

[1] เพ็ญศรี รอดมา (กรมวิทยาศาสตร์การแพทย์ กองวิเคราะห์อาหารส่งออก ฝ่ายวิเคราะห์อาหารทางจุลชีววิทยา)
[2] ปัทมา แดงชาติ (กรมวิทยาศาสตร์การแพทย์ กองวิเคราะห์อาหารส่งออก ฝ่ายวิเคราะห์อาหารทางจุลชีววิทยา)
[3] นงลักษณ์ พิสุทธิลาภ (กรมวิทยาศาสตร์การแพทย์ กองวิเคราะห์อาหารส่งออก ฝ่ายวิเคราะห์อาหารทางจุลชีววิทยา)
[4] สุมาลี บุญมา (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ คณะสัตวแพทยศาสตร์ ภาควิชาจุลชีววิทยาและวิทยาภูมิคุ้มกัน)

[1] Pensri Rodma (Department of Medical Sciences, Bangkok (Thailand). Division of Food for Export Analysis. Microbiological Analysis Section)
[2] Pattama Daengchat (Department of Medical Sciences, Bangkok (Thailand). Division of Food for Export Analysis. Microbiological Analysis Section)
[3] Nongluk Pisuttilap (Department of Medical Sciences, Bangkok (Thailand). Division of Food for Export Analysis. Microbiological Analysis Section)
[4] Sumalee Boonmar (Kasetsart University, Bangkok (Thailand). Faculty of Veterinary Medicine. Department of Microbiology)