การพัฒนาชุดทดสอบสำเร็จรูปอีไลซ่าสำหรับการตรวจแอนติบอดีต่อเชื้อ Brucella abortus ในโค

Kasetsart University, Bangkok (Thailand)
Commission of Higher Education, Bangkok (Thailand)
Ministry of Education, Bangkok (Thailand)
Ministry of Agriculture and Cooperatives, Bangkok (Thailand)
Ministry of Science and Technology, Bangkok (Thailand)
Ministry of Natural Resources and Environment, Bangkok (Thailand)
Ministry of Information and Communication Technology, Bangkok (Thailand)
National Research Council of Thailand, Bangkok (Thailand)
The Thailand Research Fund, Bangkok (Thailand)

46. Kasetsart University Annual Conference

Bangkok (Thailand)

29 Jan - 1 Feb 2008

Bangkok (Thailand)

p. 416-423

699 p.

อังกฤษ

Thai National AGRIS Centre, Office of The University Library Kasetsart University, P.O. BOX 1084 Kasetsart Chatuchak, Bangkok 10903, Thailand

L70-สัตวแพทยศาสตร์

L73-โรคสัตว์

โค;สารภูมิต้านทาน;อีไลซา;โรคบรูเซลโลซีส;ซีรั่ม;Brucella abortus;ประเทศไทย

Cattle;Antibodies;Elisa;Brucellosis;Blood serum;Brucella abortus;Thailand

โค;การตรวจหาแอนติบอดี;อีไลซ่า;โรคบลูเซลโลซิส;โรคแท้งติดต่อ;ซีรั่ม;ชุดทดสอบสำเร็จรูป;ประเทศไทย

Test kit;iELISA

ชุดทดสอบ indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (iELISA) ได้รับการพัฒนาขึ้นเพื่อใช้ตรวจหาแอนติบอดีจำเพาะต่อเชื้อ Brucella abortus โดยการสกัดแอนติเจนไลโปโพลีแซคคาไลด์ชนิดเรียบ (smooth lipopolysaccharide) จากเชื้อ B. abortus สเตรน 99 ปริมาณของแอนติเจนและความเข้มข้นของสารต่างๆที่ใช้ในการทดสอบได้ถูกปรับให้เหมาะสมโดยวิธีไตเตรชั่น และโดยการควบคุมคุณภาพของชุดทดสอบในแต่ละเพลทที่ทดสอบด้วยการใช้ผลการทดสอบจากชุดควบคุมบวก (positive serum control) ทั้งที่ให้ผลบวกรุนแรง และผลบวกอ่อน ชุดควบคุมลบ (negative serum control) และ conjugate control (Cc) การแปลผลการทดสอบใช้วิธีตัดสินผลบวกที่ เท่ากับหรือ มากกว่า 40 เปอร์เซ็นต์ การประเมินความถูกต้องของชุดทดสอบอาศัยค่าสถิติ โดยการใช้ชุดทดสอบตรวจหาแอนติบอดีจำเพาะต่อเชื้อ B. abortus จากซีรั่มโคในฝูงที่เป็นโรค 317 ตัวอย่างและไม่เป็นโรค 5,300 ตัวอย่าง ผลการทดสอบพบว่าชุดทดสอบมีค่าความไว (sensitivity, Se) เท่ากับ 99.369 (98.497-100.0) เปอร์เซ็นต์ ค่าความจำเพาะ (specificity, Sp) เท่ากับ 99.887 (99.796-99.977) เปอร์เซ็นต์ ค่าความแม่นยำ (accuracy, Ac) เท่ากับ 99.858 เปอร์เซ็นต์ และค่า Kappa เท่ากับ 0.987 และเมื่อนำชุดทดสอบไปตรวจหาแอนติบอดีจำเพาะต่อเชื้อ B. abortus จากซีรั่มของโคในพื้นที่จำนวน 9,877 ตัวอย่าง โดยใช้วิธี complement fixation เป็นวิธีมาตรฐาน พบว่ามี Se 99.026 (97.929-100.0) เปอร์เซ็นต์, Sp 98.547 (98.308-98.787) เปอร์เซ็นต์, Ac 98.562 เปอร์เซ็นต์ และค่า Kappa 0.804 ชุดทดสอบ iELISA หนึ่งชุดสามารถตรวจได้ 800 ตัวอย่าง ประกอบด้วยแอนติเจน ซีรัมควบคุม และ สารละลายที่จำเป็นพร้อมคู่มือทดสอบ ชุดทดสอบนี้มีความไวความจำเพาะ ความแม่นยำสูง เชื่อถือได้ และสามารถทดสอบซีรั่มได้ในปริมาณมากจึงเหมาะสมที่จะเลือกใช้เป็นวิธีทดสอบในการควบคุมโรคบรูเซลโลซิสของประเทศ

Indirect Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (iELISA) test kit was developed for the detection of antibody against Brucella abortus. The smooth lipopolysaccharide (SLPS) antigen was prepared from B. abortus strain 99. The system of test kit was indirect immunoassay. The data were expressed as optical density and generated using computer software. The positive results were accepted at the cut-off values of GT= 40 percent positivity (PP). The strong positive serum control (C++), weak positive serum control (C+), negative serum control (C-), and conjugate control (Cc) were used to optimize the test kit. The iELISA was optimization and standardization for antigen concentration, test material dilution and detection system dilution by checkerboard titration. The statistic evaluation using data from sera from 317 infected and 5,300 non-infected cattle revealed that the sensitivity (Se) is 99.369 (98.497-100.0) percent, specificity (Sp) is 99.887 (99.796-99.977) percent, accuracy (Ac) is 99.858 percent and Kappa value is 0.987. The iELISA test kit was subsequently validated by testing 9,877 field serum samples submitted to laboratory. The complement fixation test was used as gold standard. The results revealed that the relative Se is 99.026 (97.929-100.0) percent, relative Sp is 98.547 (98.308-98.787) percent, relative Ac is 98.562 percent and Kappa value is 0.804 when cattle sera were tested. The components of this iELISA test kit consisted of antigen, control sera, and essential diluents for 800 tests. This test showed high sensitivity, specificity, and accuracy and could be performed in mass. Therefore, it would be an appropriate tool for brucellosis control in Thailand.

[1] มนยา เอกทัตร์ (กรมปศุสัตว์ สถาบันสุขภาพสัตว์แห่งชาติ)
[2] สุรีย์ ธรรมศาสตร์ (กรมปศุสัตว์ สถาบันสุขภาพสัตว์แห่งชาติ)
[3] เรขา คณิตพันธ์ (กรมปศุสัตว์ สถาบันสุขภาพสัตว์แห่งชาติ)
[4] สุรพงษ์ วงศ์เกษมจิตต์ (กรมปศุสัตว์ สถาบันสุขภาพสัตว์แห่งชาติ)
[5] โชคชัย นกเทศ (กรมปศุสัตว์ สถาบันสุขภาพสัตว์แห่งชาติ)
[6] อุทิศ ตรีนันทวัน (กรมปศุสัตว์ สถาบันสุขภาพสัตว์แห่งชาติ)

[1] Monaya Ekgatat (Department of Livestock Development, Bangkok (Thailand). National Institute of Animal Health)
[2] Suree Thammasart (Department of Livestock Development, Bangkok (Thailand). National Institute of Animal Health)
[3] Reka Kanitpun (Department of Livestock Development, Bangkok (Thailand). National Institute of Animal Health)
[4] Surapong Wongkasemjit (Department of Livestock Development, Bangkok (Thailand). National Institute of Animal Health)
[5] Chokchai Nokhdes (Department of Livestock Development, Bangkok (Thailand). National Institute of Animal Health)
[6] Utit Trenuntawan (Department of Livestock Development, Bangkok (Thailand). National Institute of Animal Health)