การถ่ายฝากยีนในกล้วยไม้สกุลหวายโดยใช้เครื่องยิงอนุภาค

มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
สำนักงานคณะกรรมการอุดมศึกษา
กระทรวงศึกษาธิการ
กระทรวงเกษตรและสหกรณ์
กระทรวงวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี
กระทรวงทรัพยากรธรรมชาติและสิ่งแวดล้อม
กระทรวงเทคโนโลยีสารสนเทศและการสื่อสาร
สำนักงานคณะกรรมการวิจัยแห่งชาติ
สำนักงานกองทุนสนับสนุนงานวิจัย

การประชุมทางวิชาการของมหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ ครั้งที่ 42

กรุงเทพฯ

3-6 ก.พ. 2547

กรุงเทพฯ

หน้า 27-34

499 หน้า

ไทย

Thai National AGRIS Centre, Office of The University Library Kasetsart University, P.O. BOX 1084 Kasetsart Chatuchak, Bangkok 10903, Thailand

F30-ปรับปรุงพันธุ์พืช

Dendrobium;การถ่ายฝากยีน;การถ่ายฝากยีนโดยใช้กระแสไฟฟ้า

Dendrobium;Gene transfer;Electroporation

กล้วยไม้;สกุลหวาย;การถ่ายฝากยีน;เครื่องยิงอนุภาค

Dendrobium;Gene transfer;Electroporation

การศึกษาปัจจัยที่เกี่ยวกับการถ่ายฝากยีนในกล้วยไม้สกุลหวายด้วยเครื่องยิงอนุภาค โดยตรวจสอบ จากการแสดงออกของยีน gus บนพลาสมิด pBI221 เพื่อพัฒนาเสถียรภาพของวิธีการปรับปรุงพันธุ์กล้วยไม้สกุล หวาย โดยใช้เทคนิคทางพันธุวิศวกรรม พบว่า protocorm-like bodies (PLBs) ที่เลี้ยงบนอาหารแข็งสังเคราะห์ดัดเเปลงสูตร VW ซึ่งเติมสารควบคุมแรงดันออสโมติกเข้มข้น 0.25 โมลาร์ก่อนยิงอนุภาคเข้าสู่เนื้อเยื่อ การใช้ระยะห่างระหว่าง stopping screen กับเนื้อเยื่อเท่ากับ 6 เซนติเมตร และการใช้ความดันก๊าซฮีเลียมที่ระดับ 1,100 psi ส่งผลให้ยีนมีการแสดงออกมากขึ้น เมื่อเปรียบเทียบกับ PLBs กล้วยไม้ที่เลี้ยงบนอาหารซึ่งไม่เติมสาร ควบคุมแรงดันออสโมติก การใช้ระยะห่างเท่ากับ 9 และ 12 เซนติเมตร และการใช้ความดันก๊าซฮีเลียมที่ระดับ 650 และ 1,350 psi ตามลําดับ เพิ่มปริมาณ PLBs ที่ถูกยิงอนุภาคก่อนคัดเลือกโดยอาศัยความต้านทานต่อสาร กําจัดวัชพืช bialaphos ซึ่งเกิดจากการทํางานของยีน bar บนพลาสมิด pAHG11 ชักนํา PLBs ที่ได้ให้เกิดเป็น ต้นพืช วิเคราะห์ด้วยปฏิกิริยา PCR พบยีน bar ในต้นกล้วยไม้ที่คาดว่าได้รับการถ่ายฝากยีน

Factors, affecting particle bombardment-mediated transformation of Dendrobium orchid, were observed in gus expression of pBI221. The method was optimized for the use of genetic genetically engineering to improve orchid.. Maintenance of protocorm-like bodies (PLBs) in modified Vacin and Went medium supplemented with 0.25 M osmoticum before bombardment at 6 cm of the distance from the stopping screen to the target tissue, and the helium pressure at 1,100 psi, increased in gus expression when compared to the culture of PLBs in VW medium without osmoticum, bombarded at 9 or 12 cm of the distance, and the helium pressure at 650 or 1,350 psi, respectively. The bombarded PLBs were proliferated and selected for bialaphos resistance conferred by the introducing bar gene of pAHG11. Putative transgenic plantlets regeneration was induced from bialaphos-resistant PLBs. The presence of bar gene in putative transformed orchid was confirmed by PCR analysis.

[1] จิตรวดี คมเดช (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ คณะวิทยาศาสตร์ ภาควิชาพฤกษศาสตร์)
[2] นิรันดร์ จันทวงศ์ (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ คณะวิทยาศาสตร์ ภาควิชาพฤกษศาสตร์)
[3] ประศาสตร์ เกื้อมณี (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ คณะวิทยาศาสตร์ ภาควิชาพฤกษศาสตร์)
[4] มิ่งขวัญ มิ่งเมือง (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ คณะวิทยาศาสตร์ ภาควิชาวิทยาศาสตร์ทั่วไป)
[5] จารุวรรณ จาติเสถียร (มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ คณะวิทยาศาสตร์ ภาควิชาพฤกษศาสตร์)

[1] Jitrwadee Komdhet (Kasetsart Univ., Bangkok (Thailand). Faculty of Science. Dept. of Botany)
[2] Niran Juntawong (Kasetsart Univ., Bangkok (Thailand). Faculty of Science. Dept. of Botany)
[3] Prasart Kermanee (Kasetsart Univ., Bangkok (Thailand). Faculty of Science. Dept. of Botany)
[4] Mingkwan Mingmuang (Kasetsart Univ., Bangkok (Thailand). Faculty of Science. Dept. of General Science)
[5] Jaruwan chartisathian (Kasetsart Univ., Bangkok (Thailand). Faculty of Science. Dept. of Botany)