การเลี้ยงโอโอไซต์ให้สุกและการปฏิสนธินอกร่างกายในสุกร

มหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์
กระทรวงเกษตรและสหกรณ์
กระทรวงวิทยาศาสตร์ เทคโนโลยีและสิ่งแวดล้อม
ทบวงมหาวิทยาลัย

การประชุมทางวิชาการของมหาวิทยาลัยเกษตรศาสตร์ ครั้งที่ 38

กรุงเทพฯ

1-4 ก.พ. 2543

กรุงเทพฯ

หน้า 28-37

498 หน้า

ไทย

Thai National AGRIS Centre, Office of The University Library Kasetsart University, P.O. BOX 1084 Kasetsart Chatuchak, Bangkok 10903, Thailand

L53-การสืบพันธุ์สัตว์

SWINE;OVA;FERTILIZATION;GROWTH

สุกร;โอโอไซต์;การปฏิสนธินอกร่างกาย;อุณหภูมิ;การเลี้ยงโอโอไซต์;การเจริญ

งานวิจัยนี้ มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาผลของอุณหภูมิที่มีต่อความสามารถในการเจริญของ โอโอไซต์ เพื่อปฏิสนธินอกร่างกายและความเป็นไปได้ในการแช่แข็ง โดยใช้โอโอไซต์ที่เจาะได้จากฟอลลิเคิลขนาด 2-6 มม. ของรังไข่สุกรจากโรงฆ่าสัตว์ และใช้มีเดียม M199B เป็นมีเดียมพื้นฐานในการเก็บและคัดเลือก โอโอไซต์ให้สุก เลี้ยงใน IVM มีเดียม ซึ่งเป็นมีเดียม M199B ที่เสริม ฟอลลิเคิล สติมูเลติง ฮอร์โมน 1 หน่วย/มล. ลูทีไนซิง ฮอร์โมน 1 หน่วย/มล. เอสตราได ออล 1 ไมโครกรัม/มล. และของเหลวจากฟอลลิเคิล 10 เปอร์เซ็นต์ โดยปริมาตร และไข่สุกได้ทำการปฏิสนธิกับน้ำเชื้อสดที่รีดจากพ่อสุกร ใน IIVF มีเดียม ซึ่งเป็นมีเดียม M199B มีเติม คาเฟอีน 2 มิลลิโมลาร์ ทั้งการเลี้ยงไข่ให้สุกและการปฏิสนธิกระทำในตู้บ่ม อุณหภูมิ 39 องศาเซลเซียส ในบรรยากาศที่มีคาร์บอนไดออกไซด์ 5 เปอร์เซ็นต์ ในอากาศ จากการศึกษาการเจริญของโอโอไซต์ที่เลี้ยงนาน 12-48 ซม. โดยตรวจดูทุกๆ 2 ชม. พบว่าโอโอไซต์เจริญถึงระยะเมตาเฟส II ประมาณชั่วโมงที่ 32 และเริ่มมีเปอร์เซ็นต์การสุกสูง (80.5 เปอร์เซ็นต์) ตั้งแต่ชั่วโมงที่ 36 เป็นต้นไป และจากการทดสอบการปฏิสนธิของน้ำเชื้อจากพ่อพันธุ์สุกร 7 ตัว พบว่า น้ำเชื้อจากพ่อพันธุ์สุกรแต่ละตัวให้ผลการปฏิสนธิและการเจริญถึง 2-4 เซลล์ แตกต่างกัน เมื่อศึกษาเปรียบเทียบการเจริญของโอโอไซต์ที่ได้จากรังไข่ที่เก็บไว้ที่ 240 องศาเซลเซียส ก่อนนำมาเลี้ยงเป็นเวลา 0 8 12 18 หรือ 24 ชม. หลังจากนำรังไข่มาถึงห้องปฏิบัติการ พบว่าสามารถเก็บรังไข่ไว้ได้นาน 8 ชม. โดยมีเปอร์เซ็นต์ไข่สุกที่แตกต่างอย่างไม่มีนัยสำคัญทางสถิติ (P<0.05) กับโอโอไซต์ที่ได้จากการเจาะรังไข่ทันทีที่มาถึงห้องปฏิบัติการ

Porcine follicular oocytes obtained from ovaries collected from a slaughter house by aspirating the follicle 2-6 mm in diameter. M199B was used as basic medium for holding the oocytes. The oocytes were cultured in IVM medium which was M199B supplemented with follicle stimulating hormone 1 unit/ml, luteinizing hormone 1 unit/ml, oestradiol 1 microgram/ml and pig follicular fluid 10 percent v/v. Matured oocytes were fertilized, with sperm from fresh ejaculated semen obtained from boars, in IVF medium which was M199B supplemented with 2 mM caffeine. The oocytes were cultured and fertilized at 39 deg C in 5 percent CO2 in air atmosphere. The oocytes were cultured for the period of 12-48 h and checked the maturation of nucleus every 2 h. The result showed that oocytes developed to metaphase II around 32th h and high maturation rate started from 36th h. The ability of semen from boars were tested. Results showed that there were difference among boars on fertilization ability and the development of fertilized oocytes to reach 2-4 cell stage. The ovaries were kept before oocytes collection at 24 deg C for 0, 8, 12, 18 or 24 h starting from ovaries were arrived in the laboratory. Oocytes maturation were not significantly different (P>0.05) between oocytes collected from 0 h or 8 h storaged ovaries.

[1] สรรเพชญ โสภณ (จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย คณะสัตวแพทยศาสตร์ โครงการการใช้นิวเคลียร์เทคโนโลยีเพื่อส่งเสริมกิจการผสมเทียมโคนมและกระบือปลัก)
[2] มณีวรรณ กมลพัฒนะ (จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย คณะสัตวแพทยศาสตร์ โครงการการใช้นิวเคลียร์เทคโนโลยีเพื่อส่งเสริมกิจการผสมเทียมโคนมและกระบือปลัก)

[1] Sunpetch Sophon (Chulalongkorn Univ., Bangkok (Thailand). Faculty of Veterinary Science. Research Centre for Bioscience in Animal Production)
[2] Maneewan Kamonpatana (Chulalongkorn Univ., Bangkok (Thailand). Faculty of Veterinary Science. Research Centre for Bioscience in Animal Production)